暗視野顯微鏡 在普通
光學(xué)顯微鏡臺下配一個暗視野聚光器（圖4）,來自下面
光源的光線被拋物面聚光器反射，形成了橫過顯微鏡視野而不進入物鏡的強烈光束。因此視野是暗的，視野中直徑大于 0.3m的微粒將光線散射，其大小和形態(tài)可清楚看到。甚至可看到普通明視野顯微鏡中看不見的幾個毫微米的微粒。因此在某些細菌、細胞等活體檢查中常常使用。
iG \ ] 7g}lg8M 實體顯微鏡 由雙筒目鏡和物鏡構(gòu)成。放大率 7～80倍。利用側(cè)上方或下方顯微鏡燈
照明。在目鏡內(nèi)形成一個直立的放大實像，可以觀察未經(jīng)加工的物體的立體形狀、顏色及表面微細結(jié)構(gòu),并能進行顯微解剖操作,也可以觀察生物機體的組織切片。
SxHj3,`#C +wAH?q8f 熒光顯微鏡 在短波長光波(紫外光或紫藍色光,波長250～400nm）照射下，某些物質(zhì)吸收光能，受到激發(fā)并釋放出一種能量降級的較長的光波（藍、綠、黃或紅光，波長400～800nm），這種光稱熒光。某種物質(zhì)在短光波照射下即可發(fā)生熒光，如組織內(nèi)大部分脂質(zhì)和蛋白質(zhì)經(jīng)照射均可發(fā)出淡藍色熒光，稱為自發(fā)性熒光。但大部分物質(zhì)需要用熒光染料（如吖啶橙、異硫氰酸熒光素等）染色后，在短光波照射下才能發(fā)出熒光。熒光顯微鏡的光源為高壓汞燈，發(fā)出的紫外光源經(jīng)過激發(fā)濾光片(此濾光片可通過對標本中熒光物質(zhì)合宜的激發(fā)光)過濾后射向普勒姆氏分色鏡分色鏡將激發(fā)光向下反射,通過物鏡投射向經(jīng)熒光染料染色的標本。染料被激發(fā)并釋放出熒光,通過物鏡,穿過分色鏡和目鏡即可進行觀察。目鏡下方安置有屏障濾片(只允許特定波長的熒光通過)以保護眼眼及降低視野暗度。熒光顯微鏡的特點是靈敏度高，在暗視野中低濃度熒光染色即可顯示出標本內(nèi)樣品的存在，其對比約為可見光顯微鏡的 100倍。30年代熒光染色即已用于細菌、霉菌等微生物及細胞、纖維等的形態(tài)觀察和研究。如用抗酸菌熒光染色法可幫助在痰中找到結(jié)核桿菌。40年代創(chuàng)造了熒光染料標記蛋白質(zhì)的技術(shù)，這種技術(shù)現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于免疫熒光抗體染色的常規(guī)技術(shù)中，可檢查和定位病毒、細菌、霉菌、原蟲、寄生蟲及動物和人的組織抗原與抗體，可用以探討病因及發(fā)病機理，如腎小球疾病的分類及診斷，乳頭瘤病毒與子宮頸癌的關(guān)系等。在醫(yī)學(xué)實驗研究及疾病診斷方面的用途日益廣泛。
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;o ^. 偏光顯微鏡 從光源發(fā)出的光線通過空氣和普通玻璃時，在與光線垂直的平面內(nèi)的各個方向以同一振幅進行振動并迅速向前方傳遞，這是光的波動性原理�？諝馀c普通玻璃為各向同性體，又稱單折射體。如果該光源的光通過一種各向異性體（又稱雙折射體）時，會將一束光線分為各只有一個振動平面的，而且振動方向互相垂直的兩束光線。這兩束光線的振動方向、速度、折光率和波長都不相同。這樣只有一個振動平面的光線稱偏振光。偏光顯微鏡即利用這一現(xiàn)象而設(shè)計。偏光顯微鏡內(nèi)，在物鏡與目鏡間插入一個檢偏鏡片，光源與聚光器間鑲有起偏鏡片，圓形載物臺可以作360°旋轉(zhuǎn)。起偏與檢偏鏡片處于正交檢偏位時，視野完全變黑。將被檢物體放在顯微鏡臺上。若被檢物為單折射體，則旋轉(zhuǎn)鏡臺，視野始終黑暗。若旋轉(zhuǎn)鏡臺一周，視野內(nèi)被檢物四明四暗，則說明被檢物是雙折射體。許多結(jié)晶物質(zhì)（如痛風(fēng)結(jié)節(jié)中的尿酸鹽結(jié)晶、尿結(jié)石、膽結(jié)石等），人體組織內(nèi)的彈力纖維、膠原纖維、染色體和淀粉樣原纖維等都是雙折射體，可借偏振光顯微鏡術(shù)檢驗，進行定性和定量分析。
TsPx"+>7` `kn 'RZR 位相顯微鏡 又稱相差顯微鏡或相襯顯微鏡。普通光學(xué)顯微鏡之所以看不見未染色的組織、細胞和細菌、病毒等活機體的圖像，是因為通過樣品的光線變化差別（反差）很小。標本染色后改變了振幅（亮度）和波長（顏色），影響了反差而獲得圖像。但是染色會引起樣品變形，也可使有生命的機體死亡。要觀察不染色的新鮮組織、細胞或其他微小活體必須使用位相顯微鏡。位相顯微鏡的原理是兩個光波因位相差而互相干涉，出現(xiàn)光波強弱和反差的改變而成可見影像。點光源發(fā)出的光線可以表現(xiàn)為正弦波圖形(圖6a[位相顯微鏡])。兩個波峰間的距離為波長,波的振幅表示光的亮度(振幅大、亮度高)。設(shè)想同一光源發(fā)出的兩條光波,分別同時通過空氣及某種透明介質(zhì)。在通過一定厚度的某種透明介質(zhì)時，光波的速度就會降低，但是光的亮度未變。光波在通過該透明介質(zhì)后比一直在空氣中前進的另一條光波遲滯了波長，因而兩條光波出現(xiàn)了位相的變化（位相差）。但人眼不能分辨這兩條平行光線的位相差。如果這兩條光波射到光屏的同一點上，而且一條光波比另一條光波遲滯了半個波長，即兩條光波因位相相反而互相干涉抵消則光線消失，或者相對振幅相互影響而光線減弱。如果一條光波雖然遲滯了一個波長,但兩條光波位相相同,則因波的疊加而光線增強。
!ys82 位相顯微鏡是利用樣品中質(zhì)點折射率的不同或質(zhì)點厚度的不等，產(chǎn)生光線的相位差，使新鮮標本不必染色就可以看到，而且能夠觀察到活細胞內(nèi)線粒體及染色體等精細結(jié)構(gòu)，還可以應(yīng)用于霉菌、細菌、病毒等更微小活體的研究，進行標本形態(tài)、數(shù)量、活動及分裂、繁殖等生物學(xué)行為觀察，并可進行量度與比較。
+izB(E8&{J _Ra$"j 倒置式顯微鏡 普通顯微鏡鏡的物
鏡頭方向向下接近標本。倒置式顯微鏡的物鏡鏡頭則處于垂直向上的位置，因此目鏡和鏡筒的縱軸與物鏡的縱軸呈45度角。載物臺面積較大，在物鏡上方，載物臺上方有一個長
焦距聚光器和照明光源。物鏡和聚光器可裝配位相顯微鏡的附件。放大率16～80倍。組織培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿可以直接放在載物臺上，進行不染色新鮮標本及活體、細胞的形態(tài)、數(shù)量和動態(tài)觀察�？蛇M行多孔微量生物化學(xué)及免疫反應(yīng)平板的結(jié)果觀察。倒置式顯微鏡可換用普通亮視野光學(xué)鏡頭；可裝配偏振光、微分干涉差、熒光附件進行觀察。
1^*M*>&d< A/XY' 3 微分干涉差顯微鏡(DIC) 又稱干擾或干涉顯微鏡。能看到和測定微小的位相變化，與位相顯微鏡相似，使無色透明的標本具有明暗和顏色的變化，從而增強反差。在普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)上安裝偏光和干涉部件，以及360°旋轉(zhuǎn)載物臺它又利用偏振光的干涉原理。如圖7[微分干涉差顯微鏡光學(xué)原理]所示,在光源上方安置有起偏鏡片和光束分解
棱鏡。從起偏鏡片出來的直線偏振光通過光束分解棱鏡后，分成互相垂直振動的兩條直線偏振光。兩條光線經(jīng)聚光器折射后射向樣品。因樣品內(nèi)各個質(zhì)點的折射射率不同，部分光波的位相改變及因干涉而發(fā)生橫向偏移。兩條光線通過物鏡后經(jīng)第二組光束分解棱鏡相合并，由檢偏鏡發(fā)生干涉。終末像的每一個點是由物體上同一點的兩個互相重疊的不同圖像構(gòu)成的一種混合像，從而使肉眼得以辨識。
d+1q[,- 微分干涉差顯微鏡同樣可以觀察到在普通亮視野中看不見的無色透明物體,可以觀察細胞、細菌等活體,而且影像呈立體感，較位相顯微鏡的影像更細致、更逼真。可用它對活細胞的各個部位作更精細的研究。如果用白光照明，不同位相表現(xiàn)為各種顏色，轉(zhuǎn)動載物臺，顏色會發(fā)生變化。單色光照明產(chǎn)生明暗反差，各種成分呈現(xiàn)不同的對比度。微分干涉差顯微鏡又可以作為一種高度精密的超微量光學(xué)天平來使用，用以估測的干物體的精確質(zhì)量可以小到 1×克。當(dāng)細胞中所含固體物質(zhì)的濃度增加百分之一時，其折射率相應(yīng)增加0.0018。細胞各相成分的折射率可以根據(jù)它與相關(guān)區(qū)域（懸浮液區(qū)）間位種的不同而估計，從而可進一步算出一個細胞中某些成分的干燥重量。
DriJn`vtzq E^:8Jehq 攝影顯微鏡 現(xiàn)代高質(zhì)量顯微鏡均可安裝顯微照相的各種附件，可以及時完整地保留科學(xué)資料。用于照相的顯微鏡要求
光學(xué)系統(tǒng)和機件結(jié)構(gòu)精密，鏡體堅固穩(wěn)定。它裝配三目鏡筒，其中兩個45°角觀察用目鏡鏡筒和一個中央垂直鏡筒安裝 135照相機、曝光測量附件、照相目鏡及取景鏡頭，可以進行取景和調(diào)焦。聚光器能調(diào)節(jié)視場中心并配有孔徑光闌使視場照明均勻。鏡座有可調(diào)節(jié)視場光闌，有電壓表和電壓顯示燈。有可變電阻調(diào)節(jié)照明亮度。照明光源為6～12伏40～100瓦鹵素?zé)襞荨?0年代的自動曝光顯微照相裝置具有自動卷片，自動測光、自動控制曝光，測量和調(diào)整色溫以及倒易律失效的補償?shù)雀黜椆δ�，均用電子計算機自動控制，可以進行黑白感光片、彩色負片和彩色幻燈片的投照。
O>Vb7`z0< 中央垂直鏡筒又可以安裝電視攝像裝置或16mm電影攝影機及控制裝置，可對活體標本進行定時定格或連續(xù)的攝影記錄。
U4J9b p| 5Av bK T 萬能研究用攝影顯微鏡系統(tǒng) 集普通亮視野、暗視野、偏振光、熒光、位相、微分干涉差、顯微攝影等各項功能于一個系統(tǒng)中。還有電子計算機控制的低倍攝影自動聚焦、自動轉(zhuǎn)換物鏡、聚光器自動匹配、自動調(diào)整光源亮度等功能。機身安裝兩個135照相機,一個4×5英寸大版照相機。可另外安裝電視攝像和16mm電影攝影裝置，同樣具有自動卷片、自動測光、自動控制曝光、測量和調(diào)節(jié)色溫、倒易體失效補償?shù)榷囗椆δ堋?
ZeUA e \GL!x 7s1A 電子顯微鏡 光學(xué)顯微鏡的分辨本領(lǐng)由于所用光波的波長而受到限制。小于光波波長的物體因衍射而不能成像。最高級的光學(xué)顯微鏡的分辨本領(lǐng)的限度約 200nm(2000)。為了突破這一限度，可采用電子射線來代替光波。電子微粒以高速運動時，其行為類似光波的傳播過程。運動電子的波長隨其速度而定，在增壓達50萬伏時，其波長為0.001nm(0.01),即電子射線的波長約為可見光的十萬分之一,其分辨本領(lǐng)的極限約為4，其放大倍數(shù)比最高級的光學(xué)顯微鏡要高很多級。以電子射線為電子光源的顯微鏡稱為電子顯微鏡�，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)和生物學(xué)使用的電鏡分辨率為5～10,即放大率為10～20萬倍。
, cbCt 由于標本厚薄不同，超薄切片機切出的很薄的標本，可用透射式電子顯微鏡觀察。不能切得很薄的標本可用掃描式電鏡進行觀察。
bZ-"R 6a$ 透射式電子顯微鏡(TEM) 是最常用的電子顯微鏡，由電子槍、電磁
透鏡系統(tǒng)、熒光屏（或照相機）、鏡筒、鏡座、變壓器、穩(wěn)壓裝置、高壓電纜、真空泵系統(tǒng)、操縱臺等部分組成電子槍相當(dāng)于光學(xué)顯微鏡中的光源,供應(yīng)和加速從陰極熱鎢絲發(fā)射出來的電子束。電鏡所用的電壓一般在20～30萬伏特，才足以使電子槍里的電子以高速飛出。電子通過聚光透鏡，達到標本上，因為標本很薄，高速電子可以透過，并且由于標本各部分的厚度或密度不同，通過的電子就有疏密之分。電壓需要嚴格穩(wěn)定才能使成像穩(wěn)定，很小的電壓改變就會引起嚴重干擾。像的亮度可以通過電子槍來控制。
